elisa试剂盒的制备方法

包括以下步骤：

1)抗原表位的计算机筛选；

2)抗原的制备；

3)采集；

4)间接elisa方法的建立；

5)间接elisa方法的敏感性和特---验证；

6)试剂盒的稳定性验证；

7)对屠宰场进行---检测。该方法简单、快速、灵敏度高、特---强、稳定性合格、重复性好。应用本发明制得的试剂盒能有效检出戊型---，适用于大批量发病样本的检测，可用于猪戊肝的快速诊断，并预防、控制猪戊---的流行和阻断戊---由猪向人传播。

elisa试剂盒——elisa实验常见问题及解决方案

显色淡，灵敏度偏低

1  试剂盒未充分平衡 试剂盒从2～8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平衡至少20分钟，---所有试剂已平衡至室温（约25℃）

2  样品不适合做elisa检测 样品一般选择培养上清、血浆。其他样品形式可能不适合做elisa检测或者需要优化检测的条件（例如稀释液的成分）

3  酶标板在贮存或洗后拍干时过分干燥 防止板过于干燥

4  包被遭到破坏 操作温和，移液枪不能碰到孔底

5  样本和孵育条件不合适 按照说明书条件，建议孵育过程中全程振荡孵育。

6  洗涤浸泡时间过长 按照说明书操作。勿人为增加浸泡时间；

7  偶联hrp试剂污染 弃去试剂，重新配置

8  错误的稀释偶联hrp试剂 弃去试剂，重新配置

9  tmb底物孵育时间过短，因非人为因素影响，需要优化孵育时间 确定合适的孵育时间：人为判定-高浓度的标准品出现深蓝色；s4-5有淡蓝色；机器判定620 nm波长下测定od值达到0.6-0.65

10  样本浓度过高或存在基质效应 建议做不同稀释倍数，确认样本稀释倍数。

11  滤光片设置有问题或者波长选择不对 确认仪器设置及选择正确的波长检测。

12  酶标板不适合做elisa 不能使用细胞培养板，建议使用elisa高吸附力板子。

样品或标准品od超出正常范围

1  错误的样品或标准品的稀释  完全按照说明书稀释

2  偶联抗体浓度过高  按照说明书调整到的浓度

3  tmb底物孵育时间过长  调整到合适的孵育时间

4  样品或标准品污染  避免污染

5  错误的孵育时间或温度