elisa的基础是抗原或的固相化及抗原或的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或仍保持其活性,酶标记的抗原或既保留其活性,---残留elisa试剂盒价格,又保留酶的活性。在测定时,---残留elisa试剂盒报价,受检标本(测定其中的或抗原)与固相载体表面的抗原或起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率---,间接地放大了反应的结果,使测定方法达到---的敏感度。 elisa可用于测定抗原,也可用于测定。
然而,影响elisa试验结果的因素很多,故加强各个环节的才能充分发挥其方法学的优点。
1.包被:用0.05mph9.牰碳酸盐包被缓冲液将稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时---白孔,---残留elisa试剂盒,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的tmb底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2m---0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测od值:在elisa检测仪上,于450nm(若以abts显色,---残留elisa试剂盒厂家,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔od值,若大于规定的阴性对照od值的2.1倍,即为阳性。
测定技术的基础在于抗原之间的特异结合反应,所以任何的诊断剂离不开好的原料,如抗原,酶等。以前用于测定的抗原通常为各种纯化抗原,而则为纯化抗原动物后获得的多和使用杂交瘤技术得到的,而抗原或的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。近年来,随着分子生物学的发展,使用基因工程方法制备各种特殊的抗原或及其酶结合物等测定试剂几成为现实的新一代试剂,各种新型使用的测定方法也不断出现。
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